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의과학 | 혈액과 식물로부터 DNA추출​ 2 (추출된 DNA확인)

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작성자 캠프 담당자 작성일17-11-02 17:11 조회351회 댓글0건

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국립중앙과학관 세종과학실험 토론캠프

혈액과 식물로부터 DNA추출

 

 

 

1.실험목표

마우스로부터 얻은 혈액을 이용하여 혈액 특징을 이해하고식물과 혈액으로부터 추출된 DNA의 구조 및 활용성을 알아본다.

 

  

2. 실험재료

마우스 혈액, DNA extraction kit, TAE, Agarose LE, gelred, DNA ladder, 로딩 dye, PBS, 에탄올증류수아세트올세인소금 1kg, 바나나주방세제(트리오)

 

 

3. 실험기구

전자렌지전자저울약수저삼각플라스크온도계항온수조, microtube centrifuge, 전기영동장치, uv detector, 마이크로파이펫&, etube, etube rack, 킴와이프스라텍스글러브필터페이퍼 유산지나무젓가락막자사발비이커거즈

  

4. 실험방법    

 

< DNA 확인 1 >


1. 추출된 DNA를 piper을 이용하여 거름종이에 5μl, 10μl, 20μ묻혀서 스며들게 한 뒤잘 말린다.

 

2. 0.2% 아세트올세인 염색약(원액을 5배 희석)에 15분 정도 넣어둔다.

 

3. 비커에 물을 끓여 열탕에서 5분간 여분의 아세트올세인 용액을 제거한다탈색 후 색을 관찰한다.

 

 

< DNA 확인 2 - Gel 전기영동>

1. 1%의 gel을 만들기 위해서 5ml의 1XTAE에 0.05g의 Agarose gel가루를 넣고 전자레인지에 1분 정도 돌려 투명하게 녹인다.

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사진1. agarose를 hot plate에서 녹이는 모습이다.

 

2. 투명하게 녹은 gel에 gel red를 넣고 공기방울이 생기지 않도록 조심하며 gel 성형 틀에 붓는다. gel의 위쪽에 콤을 끼워준 후 gel이 굳을 때까지 15분 정도 기다린다.

  

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사진2. 녹은 agarosegel red를 넣고 틀에 부은 모습이다.

 

3. 전기영동 기기에 1XTAE를 채운 뒤 굳은 gel을 넣어준다. 제일 앞 홈에 DNA size marker1μl 넣고 순서대로 roading dye 2ul와 추출한 DNA 10μl을 잘섞은후 로딩한다..

 

4. 100V에서 30분 전기영동 한다. 전기영동 중간에 직접 눈으로 각각의 홈에서 증폭산물이 아래로 내려오는 것을 확인 할 수 있다.

 

5. 전기영동이 끝나면 gelgel tray에 담아 UV light기에서 DNA 추출여부를 확인하고 첫 줄의 사이즈마커와 비교하여 그 사이즈를 추측한다. 또한 사이즈마커와 비교하여 어떤형태로 전기영동됐는지 비교해본다. 

 

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사진3. 전기영동 후 밴드를 확인하는 모습이다.

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