화학 | Column chromatography에 의한 시금치의 색소 성분 분리
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작성자 캠프 담당자 작성일17-02-03 09:28 조회7,175회 댓글0건본문
국립중앙과학관 세종과학실험 토론캠프
크로마토그래피를 이용한 화합물의 분리
1. 실험목표 : 시금치로부터 푸른색의 chlorophyll a와 알파, 베타 카로틴, xanthophyll을 추출하고 column chromatography로 분리한다.
2. 실험재료 : Hexane, Ethyl Acetate, Methanol, NaCl, 시금치, 당근, 장미꽃
3. 실험기구 : 비이커, 막자&막자사발, 둥근 플라스크, 유리막대, 분액깔대기와 콕, ring clamp, silica gel TLC판(UV 활성, GF254), TLC병(70ml 바이알), TLC용 모세관, 스탠드, 거름종이, TLC용 UV lamp, 깔대기, 핀셋, 칼, 테이프, 마스크, 컬럼관, 바다모래(sea sand)
4. 실험방법 및 과정
-색소 추출-
1) 시금치 한포기 정도를 막자사발에 넣고 잠길 정도의 메탄올 20ml 정도를 넣고 간 다.
2) 전 과정에서 넣어준 메탄올의 양만큼 ethyl acetate를 넣고 유리막대로 잘 저어준 다.
그림1. 시금치를 막자 사발에 갈고있는 모습니다.
3) 1)2)과정을 통해 얻은 검푸른 용액을 거름종이를 이용해 한 번 거른 뒤 조심해서 분액깔대기에 붓는다.
그림2. 갈아놓은 시금치에 ethyl acetate를 넣은 후 거름종이로 여과하는 모습이다.
4) 분액깔대기에 물(10ml)과 hexane(10ml)을 각 각 넣고 잘 흔든 후에 가만히 두어 층 분리가 일어날 때까지 기다린다(층 분리가 일어나지 않으면, 포화소금물을 조금 더 넣는다.)
5) 아래의 물 층을 버리고 분액깔대기에 포화소금물 (10ml)을 넣고 흔든 후 가만히 둔다.
6) 아래의 소금물 층을 버리고 유기층을 둥근 플라스크에 따라 붓는다.
7) 이 추출용액을 rotary evaporator로 농축한다.
8) 이 과정을 당근과 장미꽃 잎에도 적용하여 반복한다.
-크로마토그래피-
1) 푸른 시금치 농축액을 소량의 1:1 hexane/EtOAc에 녹인다.
2) 이 용액을 8:2 hexane/EtOAc, 5:5 hexane/EtOAc, EtOAc 등의 전개용매로 TLC한다(전개용매에 따라 물질들이 나타나는 위치가 다를 것이다.)
그림3. 시금치 색소 추출물을 뿌린 TLC판을 전개용매에 담그는 모습니다.
그림4. 전개 용매가 들어있는 바이알에 담겨져 있는 TLC판
3) 각 TLC를 육안으로 살펴보고 UV lamp로도 본다.
4) 관찰한 TLC에 나타나나 물질들의 모양과 색깔을 기록하고 각 물질의 Rf 값을 계 산한다
5) 동일한 방법으로 당근, 장미꽃으로 실험해본다.
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